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電泳儀的這些常識你知道嗎?

發表時間:2022-04-11  |  點擊率:84
  電泳儀的這些常識你知道嗎?
  目前,電泳技術已廣泛用于蛋白質、多肽、氨基酸、核苷酸、無機離子等成份的分離和鑒定,甚至還用于細胞與病毒的研究。
  一、電泳的基本原理
  物質分子在正常情況下一般不帶電,即所帶正負電荷量相等,故不顯示帶電性。但是在一定的物理作用或化學反應條件下,某些物質分子會成為帶電的離子(或粒子),不同的物質,由于其帶電性質、顆粒形狀和大小不同,因而在一定的電場中它們的移動方向和移動速度也不同,因此可使它們分離。
  若將帶凈電荷Q的粒子放入電場,則該粒子所受到的電荷引力為:
  F引=E Q (16-1)
  在溶液中,運動粒子與溶液之間存在阻力F阻
  F阻=6πrηV (16-2)
  當F引=F阻時
  EQ= 6πrηV
  V = EQ/6πrη (16-3)
  由上式可以看出,粒子的移動速度(泳動速度V)與電場強度(E)和粒子所帶電荷量(Q)成正比,而與粒子的半徑(r)及溶液的粘度(η)成反比。
  二、影響電泳的外界因素
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 ?。ǘ┤芤旱膒H值
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  第二節 常用電泳方法
  一、紙電泳
  指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是zui早使用的區帶電泳。
  將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。
  二、醋酸纖維素薄膜電泳
  電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。
  三、凝膠電泳
  由區帶電泳中派生出的一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式。
  凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是普通電泳中應用zui多的兩種形式。
  目前,這種辦法被廣泛用來分析蛋白質和核酸。
  四、等電聚焦電泳
  1.等電聚焦電泳過程
  一種利用有pH值梯度的介質,分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。
  在一個穩定連續的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質)中進行分離,每一種被分離的兩性物質都移向與它的等電點相一致的pH位置,在那里不再移動(稱為聚焦)。
  2.等電聚焦電泳的特點
 ?、偈褂脙尚暂d體電解質,在電極之間形成穩定、連續、線性的pH梯度;
 ?、谟捎?ldquo;聚焦效應”,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區帶界面;
 ?、垭娪舅俣瓤?④分辨率高;
 ?、菁尤霕悠返奈恢每扇我膺x擇;
 ?、蘅捎糜跍y定蛋白質類物質的等電點;
 ?、哌m用于中、大分子量(如蛋白質、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。
  五、等速電泳
  采用兩種不同濃度的電解質,一種為前導電解質,充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質,置于一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高于任何樣品組分,尾隨電解質則低于任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強電場的作用下,各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動,實現分離。
  六、雙向凝膠電泳(二維電泳)
  *向采用等電聚焦  根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同,將蛋白質進行分離。
  第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀,而是呈現為斑點狀。
  七、免疫電泳
  免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開;然后加入抗體做雙相免疫擴散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇,在二者比例適當的地方,形成肉眼可見的沉淀弧。
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